武漢貝科新肽(圖)-原位雜交檢測-原位雜交
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武漢貝科新肽科技有限公司
- 主營業(yè)務(wù):原位雜交,亞細(xì)胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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FISH是原位雜交技術(shù)大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質(zhì)標(biāo)記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發(fā)明,現(xiàn)已從實驗室逐步進(jìn)入臨床診斷領(lǐng)域。基本原理是熒光標(biāo)記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復(fù)性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進(jìn)行分析。DNA熒光標(biāo)記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細(xì)胞或染色體中的DNA進(jìn)行染色體及基因水平 的分析。熒光標(biāo)記探針不對環(huán)境構(gòu)成污染,靈敏度能得到保障,可進(jìn)行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導(dǎo)致的周期過程和技術(shù)障礙。

原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果
原位雜交技術(shù)的實驗結(jié)果包括陽性信號和陰性信號的判斷標(biāo)準(zhǔn)。陽性信號是指探針與目標(biāo)核酸序列特異性結(jié)合形成的雙鏈復(fù)合物,染色體熒光原位雜交,在顯色反應(yīng)、熒光染色或性同位素標(biāo)記下呈現(xiàn)出明顯的信號。陰性信號是指探針未與目標(biāo)核酸序列結(jié)合,不呈現(xiàn)任何信號。實驗結(jié)果的分析需要結(jié)合探針的特異性和敏感性、組織或細(xì)胞的原始結(jié)構(gòu)以及實驗條件等因素綜合進(jìn)行。

FISH技術(shù)的基本步驟包括探針制備、樣品預(yù)處理、探針與樣品的雜交、信號檢測和圖像分析等。在探針制備過程中,使用熒光標(biāo)記物代替同位素標(biāo)記物來標(biāo)記探針。在樣品預(yù)處理過程中,細(xì)胞或組織的固定、裂解和去除非特異性蛋白質(zhì)等操作都是必要的,原位雜交,以提高探針與目標(biāo)序列的親和力和特異性。在探針與樣品的雜交過程中,探針與樣品中的目標(biāo)序列進(jìn)行互補(bǔ)性雜交,形成可檢測的熒光信號。在信號檢測和圖像分析過程中,使用高靈敏度熒光顯微鏡檢測熒光信號并獲取高分辨率的細(xì)胞圖像。

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