





點對點酵母雙雜交驗證實驗流程
1、誘餌蛋白毒性及自激1活檢測;
2、共轉(zhuǎn)化:分別將誘餌/捕獲質(zhì)粒(pGBKT7-Bait/pGADT7-Prey)、陽性對照質(zhì)粒(pGBKT7-p53/pGADT7-T)、陰性對照質(zhì)粒(pGBKT7-Lam/pGADT7-T)分別共轉(zhuǎn)到Y(jié)2H Gold感受態(tài)細(xì)胞中,涂布于DDO平板培養(yǎng);
3、點板驗證:分別從平板上挑單克1隆稀釋10倍、100倍、1000倍,然后點板到TDO/X/A和QDO/X/A固體培養(yǎng)基進(jìn)行驗證;
4、實驗數(shù)據(jù)與報告整理。

tunel流式細(xì)胞凋亡檢測服務(wù)通常稱為細(xì)胞程序性死1亡,是由基因控制的主動性細(xì)胞死1亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn),細(xì)胞凋亡與多種疾病密切相關(guān),如癌細(xì)胞具有連續(xù)增殖、抵抗細(xì)胞凋亡能力,利用流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞凋亡可為腫1瘤診斷,療1效評價和預(yù)后預(yù)測提供了重要的參考指標(biāo)。
TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end labeling)細(xì)胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細(xì)胞在凋亡早期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況,其原理是生物素biotinylate標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT Enzyme)的作用下,可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端,分子病理技術(shù)服務(wù),并與連接辣根過氧化酶(HRP,horse-radish peroxidase)的鏈霉親和素streptavidin特異性結(jié)合,后者又與POD底物H2O2、二氨1基聯(lián)1苯1胺(DAB)產(chǎn)生深棕色反應(yīng),特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞,因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞;由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂,因而沒有3‘-OH形成,很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟包埋、冰凍和超薄切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片)在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測。還可應(yīng)用于抗腫1瘤藥的藥1效評價,以及通過雙色法確定細(xì)胞類型和分化階段。


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