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武漢貝科新肽科技有限公司

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熒光原位雜交-武漢貝科新肽(圖)

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原位雜交技術(shù)在其他生物領(lǐng)域也有廣泛的應(yīng)用,例如:

植物學(xué)研究:在植物學(xué)研究中,原位雜交技術(shù)可以用于檢測(cè)和定位特定基因的表達(dá),研究基因組結(jié)構(gòu)和進(jìn)化。此外,還可以應(yīng)用于植物染色體組型分析、基因組印記研究等方面。

微生物學(xué)研究:在微生物學(xué)領(lǐng)域,原位雜交技術(shù)可以用于研究細(xì)菌、病毒等微生物的基因表達(dá)和定位,以及它們?cè)诃h(huán)境中的分布和相互作用。例如,通過(guò)標(biāo)記特異性探針,可以檢測(cè)腸道微生物群落中的特定,研究其在人體健康和疾病發(fā)生中的作用。

組織原位雜交(Tissue in situ hybridization),即原位雜交組織化學(xué)技術(shù)和原位雜交細(xì)胞化學(xué)技術(shù)

原位雜交技術(shù)的基本原理

利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基順序,通過(guò)堿基對(duì)之間非共價(jià)鍵的形成,出現(xiàn)穩(wěn)定的雙鏈區(qū),形成雜交的雙鏈。

1.兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,通過(guò)氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA一RNA或RNA一RNA雙鍵分子

2.應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,如3H、35S、32P,熒光素、生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測(cè)核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交

3.用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位

用原位雜交術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。

此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水來(lái)探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

這一原理對(duì)于檢測(cè)一個(gè)特異的mRNA在某一種生物體,熒光原位雜交,或者某些組織切片、單個(gè)細(xì)胞里具體表達(dá)位置非常有用。該技術(shù)早應(yīng)用于60年代末期,由于核酸分子雜交的特異性高,并可定位,因此該技術(shù)已被廣泛應(yīng)用,例如與細(xì)胞內(nèi)RNA進(jìn)行雜交以觀察該組織細(xì)胞中特定基因表達(dá)水平。原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其他成分的影響,因此對(duì)于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便;同時(shí)由于原位雜交不需要從組織中提取核酸,對(duì)于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性,并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài),更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

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