






為什么不先對一個基因做預測,在預測的結果上直接做共定位?
不同的預測網(wǎng)站有不同的計算方法,同一個基因在不同的預測網(wǎng)站也可能得出不同的定位結果。另外所有的結果都應是基于實驗得到的,對于不清楚可能定位在哪里的基因,熒光定量,一般推薦先做普通定位,根據(jù)普通定位的結果再決定做哪種細胞器的共定位。
為什么有的基因做原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化時熒光蛋白不亮?
不同物種的細胞可能對基因表達有影響,當在一種材料的原生質(zhì)體中觀察不到熒光時,可以考慮換一種受體材料。另外,如果是分泌蛋白,在原生質(zhì)體中無法觀察到熒光,此時可以考慮注射葉片來觀察熒光。
拍攝時為什么有明場通道?
(1)顯示細胞狀態(tài),有活力的原生質(zhì)體細胞應該是飽滿圓潤的,變形或破碎的細胞說明此時細胞不是適狀態(tài)或細胞已。
(2)顯示熒光確實是細胞內(nèi)蛋白表達的,而不是細胞碎片及雜質(zhì)產(chǎn)生的雜光。

細胞分餾和免疫印跡:先通過差速離心等方法將細胞勻漿分離成不同的亞細胞組分,如細胞核、線粒體、細胞質(zhì)等。然后,利用免疫印跡技術,使用針對目標蛋白的特異性來檢測該蛋白在各個亞細胞組分中的存在情況,以此推斷其亞細胞定位。
電子顯微鏡技術:包括免疫電鏡技術等,可在超微結構水平上對細胞內(nèi)的蛋白質(zhì)等生物分子進行定位。通過將特異性與細胞內(nèi)的目標蛋白結合,再用電子顯微鏡觀察標記物的位置,能夠地確定目標蛋白在細胞內(nèi)的亞細胞定位。

1. 葉綠體
葉綠體是植物細胞中重要的細胞器之一,它們負責進行光合作用,將光能轉(zhuǎn)化為化學能。為了定位葉綠體,我們可以使用一種名為熒光素的化合物來標記它們。熒光素可以被葉綠體中的葉綠素吸收,從而發(fā)出綠色熒光。在洋蔥細胞中,葉綠體通常位于細胞的邊緣或周圍。
2. 線粒體
線粒體是細胞中的另一個重要細胞器,它們負責產(chǎn)生細胞所需的能量。為了定位線粒體,我們可以使用一種名為MitoTracker的化合物來標記它們。MitoTracker可以穿過細胞膜并進入線粒體,從而發(fā)出紅色熒光。在洋蔥細胞中,線粒體通常位于細胞的中央或周圍。

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