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武漢貝科新肽科技有限公司
主營：原位雜交,亞細胞定位,蛋白互作,啟動子篩選
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DNA 探針為原位雜交提供較高的靈敏度。與RNA探針相比，DNA探針與靶mRNA 分子的雜交強度較弱，因此在雜交后的洗滌中不應使用甲醛。
探針特異性至關重要。如果已知細胞中mRNA或DNA的確切核苷酸序列，則可據此設計高度的互補探針。如果超過 5% 的堿基對不互補，染色體原位雜交，那么探針只能與靶序列發(fā)生輕度雜交。這意味著，探針更容易在洗滌和檢測步驟中被洗去，可能無法正確檢測。
一. 原位雜交天
1. 重新水化和固定
1） 吸取固定好的胚胎，加入50%的PBST溶液，放置5分鐘。
2） 置換成30％的PBST溶液，放置5分鐘
3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘，重復一次
4） 置換成4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘
5） 用PBST洗兩次，每次放置五分鐘，室溫。
蛋白酶處理與后固定（本實驗不做此步）
1） 用10ul/ml的蛋白酶K在室溫下處理胚胎。5體節(jié)以下的胚胎不處理，染色體熒光原位雜交，5體節(jié)到24小時的胚胎處理3分鐘，24小時以上的胚胎處理5分鐘或者更長。發(fā)育時間越短的胚胎越嫩，可以不用或者少用蛋白酶處理，發(fā)育時間長的胚胎就需要用蛋白酶來疏松組織，以便于雜交。
2） 用PBST溶液輕洗，在PBST中放置5分鐘。
3） 用4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。
4） 用PBST洗兩次，植物原位雜交，每次放置五分鐘，室溫。
生物領域應用原位雜交技術的例子：
物種進化與系統(tǒng)發(fā)生學研究：在物種進化與系統(tǒng)發(fā)生學研究中，原位雜交技術可以用于檢測物種之間的親緣關系和進化歷程。例如，原位雜交，可以比較不同物種之間特定基因序列的差異，進而研究它們的親緣關系和進化歷程。
原位雜交技術在基因表達和調控、細胞分化與發(fā)育、研究和物種進化與系統(tǒng)發(fā)生學等領域都有廣泛的應用價值，為深入探究生命現象、促進生物技術的發(fā)展提供了有力的技術支持。
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第3年
