





原理
原位雜交技術(shù)是在一定的溫度和離子濃度下,使具有特異序列的單鏈探針通過堿基互補(bǔ)規(guī)則與組織細(xì)胞內(nèi)待測的核酸復(fù)性結(jié)合而使得組織細(xì)胞中的特異性核酸得到定位,并通過探針上所標(biāo)記的檢測系統(tǒng)將其在核酸的原有位置上顯示出來。
經(jīng)特定標(biāo)記的核苷酸鏈為探針,可與組織切片、細(xì)胞或染色體標(biāo)本中的待檢DNA片段或mRNA進(jìn)行雜交,然后顯示標(biāo)記物,從而分析待檢核酸的分布和含量。利用此項(xiàng)技術(shù)可研究各種基因在染色體上的定位,編碼某種蛋白質(zhì)的mRNA在胞質(zhì)中的表達(dá)。

意義
在研究DNA分子原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段,在適宜的條件下,能過氫鍵結(jié)合,形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點(diǎn),應(yīng)用帶有標(biāo)記的(有性同位素,植物組織RNA原位雜交技術(shù)服務(wù),如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質(zhì))DNA或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸(RNA或DNA)片段進(jìn)行雜交,然后可用自顯影等方法予以顯示,在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位;用原位雜交技術(shù),可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。此方法有很高的敏感性和特異性,可進(jìn)一步從分子水平來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。


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