






染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標記的已知堿基序列的核酸探針,花芽原位雜交檢測服務(wù),依據(jù)堿基互補配對原理,與中期染色體玻片標本中的同源 DNA 序列進行雜交。
標記可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),然后進行放1射自顯影;也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛,再用熒光顯微鏡進行觀察,即熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization,F(xiàn)ISH)技術(shù)。

既要充分保留被測核酸,(特別是RNA)不被降解,又要盡可能維持原有組織或細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。
步驟:基本與免1疫組織化學(xué)技術(shù)相似,即組織要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊,固定1小時即可,較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40分鐘,一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶抑制處理的器具接觸標本。冷凍切片以厚5~30um佳,40℃烤箱內(nèi)干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存數(shù)月之久。

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