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分子病理診斷,是指應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù),從基因水平上檢測細胞和組織的分子遺傳學(xué)變化,以協(xié)助病理診斷和分型、指導(dǎo)靶向、預(yù)測反應(yīng)及判斷預(yù)后的一種病理診斷技術(shù)。分子病理診斷又稱分子病理檢查、分子病理檢測、分子病理技術(shù)。從本質(zhì)上講,凡是基于組織和細胞分子水平上的疾病診斷都是分子病理診斷,這是廣義的分子病理診斷,如組化診斷。但目前公認的是狹義的分子病理診斷,即基于細胞或組織基因水平的病理診斷。

染色體原位雜交實驗的基本原理是利用特定標記的已知堿基序列的核酸探針,花芽原位雜交檢測服務(wù),依據(jù)堿基互補配對原理,與中期染色體玻片標本中的同源 DNA 序列進行雜交。

標記可以用放1射性同位素(3H、35S、32P),然后進行放1射自顯影;也可以用非放1射性的熒光素生物素、地1高辛,再用熒光顯微鏡進行觀察,即熒光原位雜交(fluorescent in situhybridization,F(xiàn)ISH)技術(shù)。

既要充分保留被測核酸,(特別是RNA)不被降解,又要盡可能維持原有組織或細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。

步驟:基本與免1疫組織化學(xué)技術(shù)相似,即組織要求新鮮和迅速投入固定液。固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。標本較大時用刀片切成厚度不超過4mm的小塊,固定1小時即可,較大的標本固定不要超過2小時。某些組織對過度固定尤其敏感,如動物大腦,固定時間30-40分鐘,一般不要超過1小時。取材過程中避免手指、唾液和未經(jīng)RNA酶抑制處理的器具接觸標本。冷凍切片以厚5~30um佳,40℃烤箱內(nèi)干燥2小時后儲存在-80℃超低溫冰箱,在-20℃可保存2~3周,在-70℃可保存數(shù)月之久。

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