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玉米原位雜交檢測技術(shù)服務(wù)-科銳諾(推薦商家)

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原位雜交(in situ hybridization)將標(biāo)記的核酸探針與細(xì)胞或組織中的核酸進(jìn)行雜交,稱為原位雜交。使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置。RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。該技術(shù)是指運(yùn)用cRNA或寡核苷酸等探針檢測細(xì)胞和組織內(nèi)RNA表達(dá)的一種原位雜交技術(shù)。其基本原理是:在細(xì)胞或組織結(jié)構(gòu)保持不變的條件下,用標(biāo)記的已知的RNA核苷酸片段,按核酸雜交中堿基配對原則,與待測細(xì)胞或組織中相應(yīng)的基因片段相結(jié)合(雜交),所形成的雜交體 (Hybrids)經(jīng)顯色反應(yīng)后在光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的mRNA、rRNA和tRNA分子。RNA原位雜交技術(shù) 經(jīng)不斷改進(jìn),玉米原位雜交檢測技術(shù)服務(wù),其應(yīng)用的領(lǐng)域已遠(yuǎn)超出DNA原位雜交技術(shù)。尤其在基因分析和診斷方面能作定性、定位和定量分析,已 成為有效的分子病理學(xué)技術(shù),同時(shí)在分析低豐度和罕見的mRNA表達(dá)方面已展示了分子生物學(xué)的一重要方向。

1、組織取材:組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快,所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞在30 min 內(nèi)固定。

2、細(xì)胞組織固定目的與注意事項(xiàng):

(1)保持細(xì)胞結(jié)構(gòu);

(2)大限度地保持細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA的水平;

(3)使探針易于進(jìn)入細(xì)胞或組織。

常用的固定劑是多聚甲醛,與其它醛類固定劑不同,多聚甲醛不會與蛋白質(zhì)產(chǎn)生廣泛的交叉連接,因而不會影響探針穿透入細(xì)胞或組織。

分子病理應(yīng)用的檢測樣本主要包括石蠟組織、新鮮組織、脫落細(xì)胞、全血及其他體液等。石蠟切片標(biāo)本厚度應(yīng)在4-6μm,切片數(shù)量依據(jù)組織大小而定。樣本質(zhì)量對檢測結(jié)果和分析至關(guān)重要,病理醫(yī)師需要對可評估的樣本進(jìn)一步明確病理診斷,并評價(jià)標(biāo)本有無出血、壞死和不利于核酸檢測的前處理(例如含HCl脫鈣液處理),病變細(xì)胞(如細(xì)胞)的總量和比例,避免假陰性。進(jìn)行NGS檢測前需通過病理診斷明確其的性質(zhì)及含量,根據(jù)不同類型選擇合適的基因panel測序。組織標(biāo)本中細(xì)胞含量建議達(dá)到20%以上,低于此標(biāo)準(zhǔn)可富集后檢測。未經(jīng)病理評估的基因檢測結(jié)果不可單獨(dú)用于分子病理臨床診斷目的。

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